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专项研究> 免疫检查点
H_PD-1 /PDL1 NFAT Reporter Blockade Assay (CHO aAPC) DATASHEET
用途:功能Assay 类别:免疫检查点 研究内容: 免疫检查点 载体类型:其他 表达方式:其他 真核抗性:其他 荧光标记:其他
H_PD-1 /PDL1 NFAT Reporter Blockade Assay,可用于测定阻断PD-1/PD-L1相互作用的抗体及其他生物制剂的效能和稳定性。主要组成:PD-1效应细胞(PD-1 Effector Cells),PD-L1 aAPC/CHO-K1细胞(aAPC PDL1 CHO Cell Line)。
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描述

PD-1是激活的T细胞和B细胞表达的一种免疫抑制性受体,在对肿瘤抗体和自身抗原的免疫反应的调节中起关键作用。邻近细胞间的PD-1与其配体PD-L1PD-L2的相互作用会抑制TCR信号通路的传导以及TCR介导的细胞增殖、转录激活和细胞因子产生等效应。用于阻断PD-1/PD-L1相互作用的治疗抗体和Fc融合蛋白在治疗各种癌症的临床试验中已表达出很好的应用前景。目前用于检测anti-PD-1anti-PD-L1生物制品活性的方法依赖于初级人类T细胞和功能终点的测量,如细胞增殖、细胞表面标志物表达、干扰素γ(IFNγ)和白介素-2 (IL-2)的产生。由于依赖于供体原代细胞、复杂的试验方案和不合格的试验试剂,这些试验既费力又易变。因此,这些测定方法很难在质量控制的药物开发环境中建立。

H_PD-1 /PDL1 NFAT Reporter Blockade Assay是一种生物相关的、以MOA (mechanism of action)为基础的检测方法,可用于测定阻断PD-1/PD-L1相互作用的抗体及其他生物制剂的效能和稳定性。该试验由两种基因工程细胞系:PD-1效应细胞(PD-1 Effector Cells),即稳定表达人PD-1受体和NFAT诱导的荧光素酶报告基因的Jurkat T细胞;PD-L1 aAPC/CHO-K1细胞(aAPC PDL1 CHO Cell Line),是一种稳定表达人PD-L1和一种以抗原非依赖方式激活同源TCR的细胞表面蛋白的CHO-K1细胞。

当两种细胞共培养时,PD-1/PD-L1之间的相互作用会抑制TCR信号通路的转导及NFAT介导的luciferase表达。加入阻断PD-1/PD-L1的抗体后,这种一直会被解除,引起TCR信号通路的传导及NFAT介导的luciferase的表达。

效果验证

Figure1:2.5E4细胞量的aAPC(OKT3) PDL1 CHO-K1单克隆(C05269)与1E5细胞量的Jurkat PD1 NFAT单克隆(C05307)共培养,期间加入不同浓度的Anti-PDL1,16H后收Jurkat细胞检测Luc.

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