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luciferase报告基因
产品中心 >报告基因 >活体成像工具 >D-Luciferin Firefly,free acid
D-Luciferin Firefly,free acid
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货号

产品名称

规格

价格

GM-040601-100mg

D-Luciferin Firefly,free acid

100mg

708

GM-040601-500 mg

500mg

2556

GM-040601-1g

1g

3588

荧光素(Luciferin)是常见生物性发光报告基因荧光素酶(luciferase)在体内成像的底物。作用原理是荧光素酶在Mg2+和O2参与下催化荧光素氧化成oxyluciferin,在荧光素的氧化过程中,发出生物荧光(bioluminomescence)。然后通过化学发光仪或液闪测定仪测定生物荧光。目前市场上有三种产品形式,D-荧光素(游离酸),D-荧光素钠盐,以及D-荧光素钾盐。这三种产品主要的差别在于溶解特性上。D-荧光素(游离酸)水溶性以及缓冲体系的溶解性都很弱,除非溶于弱碱如NaOH和KOH溶液。溶于甲醇(10 mg/ml)和DMSO(50 mg/ml)。但钠盐和钾盐形式的D-荧光素能够非常容易且快速的溶入水或者缓冲液中,使用方便,溶剂无毒性,特别适合体内实验。配成液体后的这三种产品,在绝大多数的应用上都没有实质性的差别。


应用:

1)活细胞、组织或生物体内luc标记基因和荧光素酶-融合基因体内/体外表达的成像分析;

 2)广泛用于报告基因分析,免疫分析和ATP荧光卫生监测分析;


结构式:

 

货号:GM-040601-100mg, GM-040601-500mg, GM-040601-1g

CAS No:2591-17-5

分子式:C11H8N2O3S2

分子量:280.32

化学名称:4,5-Dihydro-2-(6-hydroxy-2-benzothiazolyl)-4-thiazolecarboxylic acid

纯度:≧99%

外观:近乎白色至淡黄色的粉末

溶解:0.25%浓度溶解于甲醇,形成近乎无色至浅黄色的清夜

保存:-20℃避光


使用方法:

1         体外生物发光检测

1)  1g的D-Luciferin Firefly, free acid溶解入33.3ml的无菌水中,配制成30mg/ml的储存液(200×)。混匀后用0.2µm滤膜过滤,然后立即使用或分装于-80℃避光保存,避免反复冻融,冻存的储存液可保存1年。

注:D-Luciferin Firefly, free acid储存液也可用弱碱(如 NaOH,KOH溶液)或DMSO溶解,用碱性pH溶液去溶解本品,如果有沉淀发生则需要调整pH至更高直至完全溶解。之后可以重新用酸性溶液来中和,调整至所需的pH环境。

2)用完全培养基将储存液按 1:200稀释(储存液:完全培养基1:200),配制成工作液(终浓度150µg/ml)。

3) 成像前,去除培Luciferase表达细胞中的培养基,加入1×荧光素工作液37℃孵育5min, 然后进行图像分析。

4)工作液应在使用后丢弃。

2  体内活体成像检测

1)  1g的D-Luciferin Firefly, free acid用66.6ml的DPBS(, w/o Mg2+ 和Ca2+)配制 D-荧光素工作液(15mg/ml),0.2µm 滤膜过滤除菌。混匀后立即使用或分装于-80℃避光保存,避免反复冻融。一旦使用,放到 4℃解冻,保持冰冷且避光,冻存的储存液可保存1年。

:D-Luciferin Firefly, free acid储存液也可用弱碱或DMSO(w/o Mg2+)配置。

2)  每只老鼠的注射量取决于老鼠的体重:150mg/Kg。

3) 注射入体内 10-15min后,进行成像分析。

:建议对每只动物模型都需要建立荧光素酶动力学曲线,从而确定最高信号检测时间和信号平台期。


注意事项:

1) 本品保存和操作的过程中都要避光。另外储存液过滤除菌后,-80℃分装保存,避免反复冻融。如果有条件,对储存液充氮气或氩气(防止氧化),稳定性和保存时间更长,长达1年。

2) 注射方式,动物类型以及体重等都会影响信号的发射,因此建议每次实验都要做荧光素酶动力学曲线,确定最佳信号平台期和最佳的检测时间。

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