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技术服务 >病毒服务 >腺相关病毒
腺相关病毒

腺相关病毒(Adeno-Associated Viral VectorAAV)属于微小病毒科 (parvovirus),为无包膜的单链线状DNA病毒。AAV的基因组约4700bp,包括上下游两个开放读码框架(ORF),位于分别由145个核苷酸组成的2个反向末端重复序列(ITR)之间。由于腺相关病毒具有宿主范围广、安全性高、免疫原性低、表达稳定和物理性质稳定等优点,已被广泛地应用于基础研究和临床试验中,并且腺相关病毒载体已成为世界上最常用的基因治疗载体之一。

腺相关病毒需要辅助病毒如腺病毒、单纯疱疹病毒存在的条件下,才能在感染的宿主细胞中复制合成装配蛋白,产生新的病毒颗粒。野生型AAV感染人宿主细胞后,可定点整合到19号染色体19q13.3qter处,该区域AAVS1可能与ITRRep蛋白的作用相关。

与腺病毒相比,腺相关病毒免疫原性较低,有多种血清型,可感染不同组织的细胞。AAV2是目前应用最广的腺相关病毒,对多数常见细胞均有较好效果。AAV-2是天然缺陷型病毒(生产性感染依赖于几个额外的反式因子),并且目前还没有发现它和任何的人类疾病有关联。在吉满生物使用的AAV Helper-Free System中,AAV-2 反向重复(ITR)序列和rep/cap基因分别位于缺少共同序列的单独的质粒上,以阻止生产出重组野生型病毒。

AAV Helper-Free System利用已经明确用于调节AAV复制和表达的腺病毒基因产物,并且这些基因产物能通过转染引进宿主细胞。在AAV Helper-Free System中,生产具感染性的AAV病毒颗粒所需的腺病毒基因产物(例如:E2AE4VA RNA 基因)大部分由pHelper质粒提供,其余的腺病毒基因产物由稳定表达腺病毒E1基因的AAV-293宿主细胞提供。本系统包括通过改良HEK293腺相关病毒生产能力而衍生出的AAV-293细胞。通过消除对活的辅助病毒的需求,AAV Helper-Free System提供一个更安全,更纯净和更便利的替代逆转录病毒和腺病毒的基因传递系统。

技术服务:

腺相关病毒包装流程:


服务优势:

1.  宿主细胞范围广:腺相关病毒可以感染广泛的哺乳动物细胞,重组腺相关病毒能感染分裂期和非分裂期细胞;

2.  滴度高:可以生产出≥1E12vg/ml的高滴度病毒;

3.  表达出的蛋白质可以正确的折叠和修饰;

4.  表达稳定:长期的基因表达潜能;

5.  多种血清型 :AAV1AAV2AAV5AAV6AAV7AAV8,AAV8-2M,AAV9,DJ,DJ/8,Rh10,PHP.S ,PHP.eB

6.  免疫原性低:AAV2的基因组仅4681个核苷酸,便于用常规的重组DNA技术,进行动物实验时造成的免疫反应小;

7.  安全性高:迄今从未发现野生型AAV对人体致病,重组AAV基因组序列上去除了大部分的野生型AAV基因组元件,进一步保证了安全性;


应用实例:



Journal of Neuro-Oncology(2017). [IF=2.98]. Epigenetically controlled Six3 expression regulates glioblastoma cell proliferation and invasion alongside modulating the activation levels of WNT pathway members.


[1] Prasad K M R, Xu Y, Yang Z, et al. Robust cardiomyocyte-specific gene expression following systemic injection of AAV: in vivo gene delivery follows a Poisson distribution[J]. Gene therapy, 2011, 18(1): 43.
[2] Inagaki K, Fuess S, Storm T A, et al. Robust Systemic Transduction with AAV9 Vectors in Mice: Efficient Global Cardiac Gene Transfer Superior to That of AAV8[J]. Molecular Therapy, 2006, 14(1):45.
[3] Vandendriessche T, Thorrez L, Acosta‐Sanchez A, et al. Efficacy and safety of adeno‐associated viral vectors based on serotype 8 and 9 vs. Lentiviral vectors for hemophilia B gene therapy[J]. Journal of Thrombosis and Haemostasis, 2007, 5(1): 16-24.
[4]Ayers JI, Fromholt S, Sinyavskaya O, et al.Widespread and Efficient Transduction of Spinal Cord and Brain Following Neonatal AAV Injection and Potential Disease Modifying Effect in ALS Mice[J].Mol Ther. 2015 Jan;23(1):53-62
[5]Chadderton N, Millington-Ward S, Palfi A, et al. Improved retinal function in a mouse model of dominant retinitis pigmentosa following AAV-delivered gene therapy[J]. Molecular Therapy, 2009, 17(4): 593-599.



附表1.可供选择的载体;

附表2.不同血清型AAV的组织嗜亲性;

附表3.不同AAV血清型对相同的组织和细胞具有不同的感染效率;

附表4.各种病毒的特点;


附表1.可供选择的载体:

编号

载体类型

载体用途

载体元件

PGMAAV-4895

腺相关病毒

过表达

GPAAV-CAGCAGGSA-MCS-WPRE

PGMAAV-4901

腺相关病毒

过表达

GPAAV-CaMKIIa-MCS-mCherry-WPRE

PGMAAV-4862

腺相关病毒

过表达

GPAAV-CaMKIIa-MCS-WPRE

PGMAAV-4892

腺相关病毒

过表达

GPAAV-CMV-MCS-3×Flag-T2A-eGFP-WPRE

PGMAAV-4890

腺相关病毒

过表达

GPAAV-CMV-MCS-3×Flag-T2A-mCherry-WPRE

PGMAAV-4869

腺相关病毒

过表达

GPAAV-CMV-MCS-3×Flag-WPRE

PGMAAV-4866

腺相关病毒

过表达

GPAAV-CMV-MCS-eGFP-3Flag-WPRE

PGMAAV-4878

腺相关病毒

过表达

GPAAV-CMV-MCS-WPRE

PGMAAV-4891

腺相关病毒

过表达

GPAAV-EF1a-eGFP-MCS-WPRE

PGMAAV-4889

腺相关病毒

过表达

GPAAV-EF1a-MCS-WPRE

PGMAAV-4896

腺相关病毒

过表达

GPAAV-GFAP-MCS-WPRE

PGMAAV-4894

腺相关病毒

过表达

GPAAV-hSyn-eGFP-MCS-WPRE

PGMAAV-4907

腺相关病毒

过表达

GPAAV-hSyn-MCS-mCherry-WPRE

PGMAAV-4864

腺相关病毒

过表达

GPAAV-hSyn-MCS-WPRE

PGMAAV-PA0

腺相关病毒

过表达

PGMAAV-CMV-intron-MCS

PGMAAV-MA2

腺相关病毒

过表达/miRNA过表达

GPAAV-CMV-mCherry-MCS-WPRE

PGMAAV-MA1

腺相关病毒

过表达/miRNA过表达

GPAAV-CMV-eGFP-MCS-WPRE

PGMAAV-SB1

腺相关病毒

RNAi

PGMAAV-CMV-intron-ZsGreen1-hU6-MCS

PGMAAV-4381

腺相关病毒

RNAi

PGMAAV-CMV-intron-mCherry-hU6-MCS

 

附表2.不同血清型AAV的组织嗜亲性:

吉满生物在包装腺相关病毒时有多种不同的AAV血清型可供客户选择,建议客户针对不同组织器官选择相应血清型的AAV病毒,见下表。




附表3.不同AAV血清型对相同的组织和细胞具有不同的感染效率:

Cell Line

AAV-1

AAV-2

AAV-3

AAV-4

AAV-5

AAV-6

AAV-8

AAV-9

AAV-DJ

AAV-DJ/8

Huh-7

13

100

2.5

0.0

0.1

10

0.7

0.0

500

0.2

HEK293

25

100

2.5

0.1

0.1

5

0.7

0.1

500

0.3

HeLa

3

100

2.0

0.1

6.7

1

0.2

0.1

667

0.2

HepG2

3

100

16.7

0.3

1.7

5

0.3

ND

1250

0.5

Hep1A

20

100

0.2

1.0

0.1

1

0.2

0.0

400

0.1

911

17

100

11

0.2

0.1

17

0.1

ND

500

0.0

CHO

100

100

14

1.4

333

50

10

1.0

25000

5.0

COS

33

100

33

3.3

5.0

14

2.0

0.5

500

0.3

MeWo

10

100

20

0.3

6.7

10

1.0

0.2

2857

1.0

NIH3T3

10

100

2.9

2.9

0.3

10

0.3

ND

500

0.1

A549

14

100

20

ND

0.5

10

0.5

0.1

1000

0.1

HT1180

20

100

10

0.1

0.3

33

0.5

0.1

333

0.2

Monocytes

1111

100

ND

ND

125

1429

ND

ND

100

ND

Immature DC

2500

100

ND

ND

222

2857

ND

ND

200

ND

Mature DC

2222

100

ND

ND

333

3333

ND

ND

100

ND

AAV-2 作为标准,感染效率为 100. ND =未检测

[1]Grimm D, Lee J S, Wang L, et al. In vitro and in vivo gene therapy vector evolution via multispecies interbreeding and retargeting of adeno-associated viruses [J]. Journal of virology, 2008, 82(12): 5887-5911.

附表4.各种病毒的特点:

病毒表达系统

腺病毒表达系统

慢病毒表达系统

腺相关病毒系统

病毒基因组

双链DNA病毒

RNA病毒

单链DNA病毒

是否整合

病毒基因组游离于宿主基因组外,瞬时表达外源基因

病毒基因组整合于宿主基因组,长时间、稳定表达外源基因

低频整合

感染细胞类型

感染分裂和不分裂细胞

感染分裂和不分裂细胞

分裂和非分裂细胞

表达丰度

高水平表达

高水平表达

高水平表达

表达时间

快(1-2 天)

慢(2-4 天)

快(1-2 天)

滴度

滴度高达1E12pfu/ml

最高可达1E910TU/ml

最高可达1E913TU/ml

克隆容量

可插入高达8kb的外源片段,滴度随插入片段长度增加而降低

可插入不超过8kb的外源片段,滴度随插入片段长度增加而降低

可插入不超过3 kb外源DNA片段,滴度随插入片段长度增加而降低

免疫原性

高免疫原性

低免疫原性

低免疫原性

动物模型

不能得到转基因动物

可产生转基因动物,效率达50以上

可产生转基因动物

启动子

可以更换特异性启动子

可以更换特异性启动子

可以更换特异性启动子

能否用于MIRCORNA

可以

可以

可以

能否用于四环素诱导

不可以

TET-ONTET-OFF

TET-ONTET-OFF


其它相关产品:

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