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技术服务 >CRISPR/Cas9服务 >dCAS9-SAM慢病毒服务
dCAS9-SAM慢病毒服务

2015年Konermann等人在《Nature》上发表的CRISPR SAM通过dCas9-VP64融合蛋白、改造过的sgRNA、RNA结合激活蛋白三个原件,实现了对多数细胞内源基因的特异性激活。该系统灵活方便,为研究基因功能提供了极为便利的工具。

SAM系统具有转录激活功能,需要三个组成部分:

  • dCas9与VP64的激活区结合:Cas9内切活性丧失,形成dCas9,不切割DNA链,但仍能与靶区域结合。dCas9与转录激活域 (vp64)进行融合。VP64与p65及HSF1协同作用,增强内源基因的转录。
  • sgRNA的设计:基于sgRNA的设计,最终复合物靶向内源基因转录起始位点(Transcriptional Start Site (TSS))的-200bp处,上调基因表达。通常sgRNA与Cas9结合形成Cas9-sgRNA复合物,而MS2 RNA适配子使得SAM系统的第三个组件能与Cas9-sgRNA复合物结合。
  • MS2-P65-HSF1激活辅助蛋白:MS2蛋白与p65及HSF1转录激活域融合后形成MS2-P65-HSF1,VP64协同转录激活域p65及HSF1,MS2与sgRNA-dCas9复合物结合,从而提高dCas9介导的基因活化效率。

上述三个组件分别克隆至不同的慢病毒表达载体(见表1),三个载体只有同时转导入细胞中,SAM才能发挥活性。


dCas9-SAM作用原理图:


吉满服务:


吉满验证实例:



表1.吉满现有慢病毒表达载体:

载体编号

载体名称

筛选标记

版本号

GM-8751

Lenti MS2-P65-HSF1_Hygro

Hygro

V1

GM-7290

Lenti dCAS-VP64_Blast

Blast

V1

GM-8153

GLenti_sgRNA(MS2)_Puro

Puro

V1

GM-9214

Glenti MS2-P65-HSF1_Puro

Puro

V2

GM-7290

lenti dCAS-VP64_Blast

Blast

V2

GM-9212

Glenti_sgRNA(MS2)_Neo

Neo

V2

GM-9213

Glenti_sgRNA(MS2)_EGFP

EGFP

V2

GM-9349

Glenti_sgRNA(MS2)_Hygro

Hygro

V2


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