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细胞转染 | 提高转染效率的小tips
吉满生物
2024-09-29

产品使用技巧



试剂 Genoagent


GMTrans脂质体核酸转染试剂是一种多用途的脂质体转染试剂, 适用于DNA、RNA和寡核苷酸的转染,对大多数真核细胞具有很高的转染效率。其独特的配方使其可直接加入培养基中,血清的存在不会影响转染效率,这样可以减少了去除血清对细胞的损伤。转染后不需要除去核酸-GMTrans复合物或更换新鲜培养基,也可在4 ~6小时后除去。


特点:高效性、低毒性、操作方便且多样性


转染tips


一、GMTrans 脂质体核酸转染试剂要求细胞铺板密度较高,以 60%-80%为佳,这有助于减少阳离子脂质体细胞毒性造成的影响,具体铺板密度需要预实验摸索


*如果你研究的基因要求比较长的表达时间,比如细胞周期相关基因或细胞表面蛋白,最好选择细胞铺板密度要求较低的转染试剂,不适合用脂质体核酸转染试剂。


二、GMTrans 脂质体核酸转染试剂可用于有血清培养基的转染,并且转染前后不需要换培养基。但制备转染复合物时要求用无血清培养基稀释 DNA 和转染试剂,因为血清会影响复合物的形成。另外,要检测所用的无血清培养基与脂质体核酸转染试剂的相容性,已知 CD293,SFMII,VP-SFM 就不相容。


三、转染的时候培养基中不能添加抗生素


四、使用高纯度的 DNA 或 RNA 有助于获得较高的转染效率,质粒中的内毒素是转染的大敌


五、阳离子脂质体应该在 4℃保存,要注意避免反复长时间开盖,可能会导致脂质体氧化而影响转染效率


六、初次使用应优化 DNA 浓度和阳离子脂质体试剂量以得到最大的转染效率。DNA 和转染试剂的比例,通常推荐是1:2-1:3,比如 24 孔板内接种 0.5-2×105个细胞,使用 0.5 µg DNA 和 1-1.5 µL 转染试剂。通过调整 DNA/GMTrans 脂质体核酸转染试剂比例优化转染效率,保证细胞密度大于90%,DNA(μg): GMTrans(μL)比值在 1:0.5-1:5


数据展示



文献引用


Geng X, Tang Y, Gu C, et al. Integrin αVβ3 antagonist-c (RGDyk) peptide attenuates the progression of ossification of the posterior longitudinal ligament by inhibiting osteogenesis and angiogenesis[J]. Molecular Medicine, 2024, 30(1): 57.
Xiao C, Liu J, Cheng Y, et al. RUNX1 targeting AKT3 promotes alveolar hypercoagulation and fibrinolytic inhibition in LPS induced ARDS[J]. Respiratory Research, 2024, 25(1): 54.
Han B, Lv Y, Moser D, et al. ACE2-independent SARS-CoV-2 virus entry through cell surface GRP78 on monocytes–evidence from a translational clinical and experimental approach[J]. EBioMedicine, 2023, 98.
Gong H Y, Zhou P C, Zhang H Y, et al. Transcriptional regulation of Glis2 in hepatic fibrosis[J]. Experimental & Molecular Medicine, 2023, 55(7): 1462-1478.
Feng W, Jin Q, Ming-Yu Y, et al. MiR-6924-5p-rich exosomes derived from genetically modified Scleraxis-overexpressing PDGFRα (+) BMMSCs as novel nanotherapeutics for treating osteolysis during tendon-bone healing and improving healing strength[J]. Biomaterials, 2021, 279: 121242.
Wang P, Gao R, Wu T, et al. Accumulation of endogenous adenosine improves cardiomyocyte metabolism via epigenetic reprogramming in an ischemia-reperfusion model[J]. Redox Biology, 2023, 67: 102884.
Wang X, Guo L, Huang J, et al. Plasminogen activator inhibitor-1 potentiates neutrophil infiltration and tissue injury in colitis[J]. International journal of biological sciences, 2023, 19(7): 2132.


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CNR1(CB1):曾因"自杀风险"沉寂,如今重回减重赛道
利莫那班退市之后,CB1沉寂了近二十年。如今,这个靶点上有了新进展。

2008年,赛诺菲的利莫那班(rimonabant,商品名Acomplia)因抑郁、自杀相关风险等神经精神安全性问题在欧洲暂停销售,2009年正式撤销上市许可,FDA也始终未批准其上市[1,2,3]。此后,CB1减重药物的开发长期停摆。

近年来,incretin类药物已经大幅提高了肥胖治疗的效果,但仍有患者疗效不足、无法耐受,或者停药后体重反弹,非incretin靶点因此还有开发价值[4]。而外周CB1调控的减重活性日前在人体研究中得到验证,让这个沉寂已久的靶点再次进入产业界视野。

2026年9月14日,Corbus Pharmaceuticals公布口服外周限制性CB1反向激动剂CRB-913的CANYON-1研究(1b期)阳性顶线数据。20 mg、40 mg和60 mg三个剂量组都观察到具有统计学显著性的减重效果,截至第12周未见明显平台期;60 mg组第12周LS均数体重下降5.0%,完成研究的受试者中44.4%减重至少5%,最高个体减重达到13.4%[5]。

安全性上,188名接受CRB-913治疗的受试者中,没有报告严重或重度精神类不良事件,也没有报告自杀倾向,精神类不良事件以轻至中度为主[5]。外周限制能否既保住减重活性、又降低中枢风险,是CB1重启开发需要回答的核心问题之一,而这批数据给出了积极的早期临床信号。
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细胞转染 | 提高转染效率的小tips
吉满生物
2024-09-29

产品使用技巧



试剂 Genoagent


GMTrans脂质体核酸转染试剂是一种多用途的脂质体转染试剂, 适用于DNA、RNA和寡核苷酸的转染,对大多数真核细胞具有很高的转染效率。其独特的配方使其可直接加入培养基中,血清的存在不会影响转染效率,这样可以减少了去除血清对细胞的损伤。转染后不需要除去核酸-GMTrans复合物或更换新鲜培养基,也可在4 ~6小时后除去。


特点:高效性、低毒性、操作方便且多样性


转染tips


一、GMTrans 脂质体核酸转染试剂要求细胞铺板密度较高,以 60%-80%为佳,这有助于减少阳离子脂质体细胞毒性造成的影响,具体铺板密度需要预实验摸索


*如果你研究的基因要求比较长的表达时间,比如细胞周期相关基因或细胞表面蛋白,最好选择细胞铺板密度要求较低的转染试剂,不适合用脂质体核酸转染试剂。


二、GMTrans 脂质体核酸转染试剂可用于有血清培养基的转染,并且转染前后不需要换培养基。但制备转染复合物时要求用无血清培养基稀释 DNA 和转染试剂,因为血清会影响复合物的形成。另外,要检测所用的无血清培养基与脂质体核酸转染试剂的相容性,已知 CD293,SFMII,VP-SFM 就不相容。


三、转染的时候培养基中不能添加抗生素


四、使用高纯度的 DNA 或 RNA 有助于获得较高的转染效率,质粒中的内毒素是转染的大敌


五、阳离子脂质体应该在 4℃保存,要注意避免反复长时间开盖,可能会导致脂质体氧化而影响转染效率


六、初次使用应优化 DNA 浓度和阳离子脂质体试剂量以得到最大的转染效率。DNA 和转染试剂的比例,通常推荐是1:2-1:3,比如 24 孔板内接种 0.5-2×105个细胞,使用 0.5 µg DNA 和 1-1.5 µL 转染试剂。通过调整 DNA/GMTrans 脂质体核酸转染试剂比例优化转染效率,保证细胞密度大于90%,DNA(μg): GMTrans(μL)比值在 1:0.5-1:5


数据展示



文献引用


Geng X, Tang Y, Gu C, et al. Integrin αVβ3 antagonist-c (RGDyk) peptide attenuates the progression of ossification of the posterior longitudinal ligament by inhibiting osteogenesis and angiogenesis[J]. Molecular Medicine, 2024, 30(1): 57.
Xiao C, Liu J, Cheng Y, et al. RUNX1 targeting AKT3 promotes alveolar hypercoagulation and fibrinolytic inhibition in LPS induced ARDS[J]. Respiratory Research, 2024, 25(1): 54.
Han B, Lv Y, Moser D, et al. ACE2-independent SARS-CoV-2 virus entry through cell surface GRP78 on monocytes–evidence from a translational clinical and experimental approach[J]. EBioMedicine, 2023, 98.
Gong H Y, Zhou P C, Zhang H Y, et al. Transcriptional regulation of Glis2 in hepatic fibrosis[J]. Experimental & Molecular Medicine, 2023, 55(7): 1462-1478.
Feng W, Jin Q, Ming-Yu Y, et al. MiR-6924-5p-rich exosomes derived from genetically modified Scleraxis-overexpressing PDGFRα (+) BMMSCs as novel nanotherapeutics for treating osteolysis during tendon-bone healing and improving healing strength[J]. Biomaterials, 2021, 279: 121242.
Wang P, Gao R, Wu T, et al. Accumulation of endogenous adenosine improves cardiomyocyte metabolism via epigenetic reprogramming in an ischemia-reperfusion model[J]. Redox Biology, 2023, 67: 102884.
Wang X, Guo L, Huang J, et al. Plasminogen activator inhibitor-1 potentiates neutrophil infiltration and tissue injury in colitis[J]. International journal of biological sciences, 2023, 19(7): 2132.


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