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细胞永生化工具 | 永生化慢病毒的应用原理及方法
吉满生物
2024-10-09

什么是永生化?


永生化是一种细胞生物学术语。是指动物细胞脱分化失败,受到病毒感染,外源恶意代码转染,辐射或药剂作用后,细胞分裂次数限制机制和DNA检查-自毁机制失灵,导致细胞具有无限分裂生长的能力的过程成为细胞永生化。


(永生化原理图)


永生化细胞的价值


1.永生化细胞稳定均一、性状一致,是体外研究细胞增殖、分化、凋亡、衰老等的理想模型

2.可使传代困难、增殖慢、易衰老的细胞获得永生,并且永生化细胞比原代细胞更易于培养,因为它们生长更强劲,可以获得更多的细胞资源,也节省了分离细胞的周期,降低反复分离原代细胞的成本

3.永生化细胞和肿瘤细胞关系密切,是研究肿瘤发生机制的重要模型

4.永生化细胞可建立稳定细胞库,遗传上相同的种群,有助于提供一致且可重复的实验结果


不同细胞永生化的方法也不同


HPV 可介导人的包皮细胞、角化上皮以及乳腺、胰导管和口腔等的上皮细胞永生化

猿猴病毒的SV40大T抗原 (TAg)用于黏附细胞、成纤维细胞、内皮细胞等

EBV 用于淋巴母细胞样细胞

端粒酶TERT 用于间充质干细胞和其他一些细胞


永生化成功的标志


1.细胞类型未发生转化(通过观察分析)

2.细胞可以持续稳定地分裂(与原代细胞进行同步传代验证分析)


目前,较为常用是SV40大T抗原(TAg)和人端粒酶催化亚基(TERT)。此外,还有抑癌基因如p53, pRb等表达受到抑制,使得细胞老化途径受阻。


吉满生物依托高效的慢病毒研发平台,可以提供多种永生化基因的慢病毒产品。点击了解产品



产品清单



引文展示


案例一:建立Hertwig上皮根鞘原代细胞(HERS)永生化细胞系


吉满助力


使用pGMLV-SV40T-PURO(Genomeditech Co., Ltd.)转染原代分离的1代HERS细胞,采用有限稀释方法筛选并鉴定得到可培养超过50代以上的单克隆细胞HERS-H1和HERS-C2。通过CCK-8法、免疫荧光染色和real-time PCR检测了HERS-H1和HERS-C2细胞的增殖、上皮-间充质转化能力和上皮-间充质相互作用等特征。HERS-C2细胞具有EMT特征,在体外可分化为牙骨质形成细胞,在体内可生成牙骨质样组织。HERS-H1能诱导DPCs在体外向成牙本质细胞分化,在体内生成牙本质样组织。


来源于Stem Cell Res.Ther.(IF:7.5;Q1).2019 Jan 3;10(1):3.DOI:10.1186/s13287-018-1106-8


案例二:建立肺泡巨噬细胞(AMs)永生化细胞系


吉满助力


作者从RGS1fl/fl;Flt3-creERt2 YFP 和 RGS1 fl/fl ;Tie2-creERt2 YFP小鼠分离获得的Flt3+ AMs和Tie2+ AMs细胞(图B) 经pGMLV-SV40T lentivirus(Genomeditech Co., Ltd.) 慢病毒感染获得稳定传代的AMs永生化细胞系,加tamoxifen诱导后,流式检测RGS1和YFP的表达变化(图C)。


来源于Cell Death Differ(IF:12.4;Q1).2021 Jul;28(7):2238-2256.DOI:10.1038/s41418-021-00750-x.

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吉满生物
2024-10-09

什么是永生化?


永生化是一种细胞生物学术语。是指动物细胞脱分化失败,受到病毒感染,外源恶意代码转染,辐射或药剂作用后,细胞分裂次数限制机制和DNA检查-自毁机制失灵,导致细胞具有无限分裂生长的能力的过程成为细胞永生化。


(永生化原理图)


永生化细胞的价值


1.永生化细胞稳定均一、性状一致,是体外研究细胞增殖、分化、凋亡、衰老等的理想模型

2.可使传代困难、增殖慢、易衰老的细胞获得永生,并且永生化细胞比原代细胞更易于培养,因为它们生长更强劲,可以获得更多的细胞资源,也节省了分离细胞的周期,降低反复分离原代细胞的成本

3.永生化细胞和肿瘤细胞关系密切,是研究肿瘤发生机制的重要模型

4.永生化细胞可建立稳定细胞库,遗传上相同的种群,有助于提供一致且可重复的实验结果


不同细胞永生化的方法也不同


HPV 可介导人的包皮细胞、角化上皮以及乳腺、胰导管和口腔等的上皮细胞永生化

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EBV 用于淋巴母细胞样细胞

端粒酶TERT 用于间充质干细胞和其他一些细胞


永生化成功的标志


1.细胞类型未发生转化(通过观察分析)

2.细胞可以持续稳定地分裂(与原代细胞进行同步传代验证分析)


目前,较为常用是SV40大T抗原(TAg)和人端粒酶催化亚基(TERT)。此外,还有抑癌基因如p53, pRb等表达受到抑制,使得细胞老化途径受阻。


吉满生物依托高效的慢病毒研发平台,可以提供多种永生化基因的慢病毒产品。点击了解产品



产品清单



引文展示


案例一:建立Hertwig上皮根鞘原代细胞(HERS)永生化细胞系


吉满助力


使用pGMLV-SV40T-PURO(Genomeditech Co., Ltd.)转染原代分离的1代HERS细胞,采用有限稀释方法筛选并鉴定得到可培养超过50代以上的单克隆细胞HERS-H1和HERS-C2。通过CCK-8法、免疫荧光染色和real-time PCR检测了HERS-H1和HERS-C2细胞的增殖、上皮-间充质转化能力和上皮-间充质相互作用等特征。HERS-C2细胞具有EMT特征,在体外可分化为牙骨质形成细胞,在体内可生成牙骨质样组织。HERS-H1能诱导DPCs在体外向成牙本质细胞分化,在体内生成牙本质样组织。


来源于Stem Cell Res.Ther.(IF:7.5;Q1).2019 Jan 3;10(1):3.DOI:10.1186/s13287-018-1106-8


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作者从RGS1fl/fl;Flt3-creERt2 YFP 和 RGS1 fl/fl ;Tie2-creERt2 YFP小鼠分离获得的Flt3+ AMs和Tie2+ AMs细胞(图B) 经pGMLV-SV40T lentivirus(Genomeditech Co., Ltd.) 慢病毒感染获得稳定传代的AMs永生化细胞系,加tamoxifen诱导后,流式检测RGS1和YFP的表达变化(图C)。


来源于Cell Death Differ(IF:12.4;Q1).2021 Jul;28(7):2238-2256.DOI:10.1038/s41418-021-00750-x.

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