什么是细胞自噬?
简单的说就是“吃掉自己”。是真核生物中进化保守的对细胞内物质进行周转的重要过程。
该过程中一些损坏的蛋白或细胞器被双层膜结构的自噬小泡包裹后,送入溶酶体(动物)或液泡(酵母和植物)中进行降解并得以循环利用。自噬包括生理条件下的基础型自噬和应激条件下的诱导型自噬。研究表明,自噬能在细胞稳态、衰老、免疫、肿瘤发生及神经退行性疾病等多种生理病理过程中发挥重要作用。
(自噬原理图)
LC3(自噬标志物)是微管相关蛋白轻链3(MAP1LC3)的简称,它贯穿整个自噬过程,哺乳动物的LC3可分为三种:LC3A、LC3B和LC3C。
自噬发生时,LC3 蛋白合成后立即在其羧基端被 Atg4 所剪切,产生细胞浆定位的 LC3-I。在自噬过程中,LC3-I 会被包括 Atg7 和 Atg3 在内的泛素样体系所修饰和加工,产生分子量为 14kD 的 LC3-II,并定位到自噬小体中。
LC3-II 的含量和发生自噬的程度成正比,LC3-II/I比值的大小可估计自噬水平的高低。
得益于荧光蛋白技术的发展,我们可以通过荧光蛋白标记的方式,直观的看到自噬现象和过程。
自噬病毒工具,便于直接感染目的细胞后直观地观察细胞自噬的整体水平。
自噬单荧光标记慢病毒
吉满自主研发出单荧光(绿光或红光)标记的自噬指示产品,当细胞内没有自噬发生时,荧光-LC3融合蛋白会均匀地分散在细胞质中,一旦细胞发生自噬活动,荧光-LC3融合蛋白就会聚集并转位到自噬体膜,此时在荧光显微镜下可清晰地观察到明亮的荧光斑点,斑点数量的多少就代表了自噬活动的强弱。
自噬双荧光标记慢病毒
吉满自主研发的双荧光自噬慢病毒,可用于标记及追踪LC3以及自噬流的变化。其中GFP是酸敏感型GFP蛋白,而mRFP是稳定的荧光表达基团,不受外界影响。由于自噬小体进入第二阶段后,与溶酶体进行融合,形成自噬溶酶体。由于自噬溶酶体内的酸性环境,导致PH下降,GFP淬灭,因此,GFP的减弱表明溶酶体与自噬小体融合形成了自噬溶酶体。而mRFP是一直稳定表达的,因而可以通过GFP与mRFP的亮点比例来评价自噬流进程。点击了解产品
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