质粒(Plasmid)—— 基因工程中最常见的运载体。是附加到细胞中的非细胞的染色体或核区DNA原有的能够自主复制的较小的DNA分子(即细胞附殖粒、又胞附殖粒)。绝大多数质粒是闭合环状的双链DNA分子。
质粒载体是在天然质粒的基础上为适应实验室操作而进行人工构建的质粒。与天然质粒相比,质粒载体通常带有一个或一个以上的选择性标记基因(如抗生素抗性基因)和一个人工合成的含有多个限制性内切酶识别位点的多克隆位点序列,并去掉了大部分非必需序列,使分子量尽可能减少,以便于基因工程操作。
大量获取质粒可以通过质粒扩增的方式,其方法通常包括将细菌质粒转化到大肠杆菌(感受态)中,然后借助大肠杆菌的摇菌扩增实现质粒的扩增,再通过抽提的方式收获大量质粒。质粒扩增需要的源头质粒量非常小,1ug的质粒已经能够满足扩增的需要,这也使得质粒的重复使用变得非常容易,因此质粒发货后无序列问题不退不换。
质粒DNA示意图