转录因子是一类参与基因转录调控的重要调节因子。不同转录因子的DNA结合结构域识别不同基因启动子区特定的碱基序列,行使抑制或激活该基因转录的功能。将目的基因启动子区域(通常取转录起始位点TSS上游-2000bp)、或针对结合位点进行突变、或分段截断序列,构建到报告基因载体luciferase的上游,共转染转录因子过表达质粒,通过荧光素酶活反映转录因子对启动子活性的调控作用。
启动子是基因的一个组成部分,作为基因表达的“开关”,控制基因表达的起始时间和表达的程度。启动子本身并不控制基因活动,而是通过与称为转录因子的这种具有特殊结构的蛋白质结合而控制基因活动的。也就是说启动子是指能启动基因转录的序列,启动子对基因的表达是必须的,如果一个基因要表达,那么它的前面一定要有一段启动子序列,RNA聚合酶等蛋白会结合到启动子上才能开始基因的转录。但真核生物基因在无转录因子时处于不表达状态,因为RNA聚合酶自身无法启动基因的转录,只有当转录因子结合到其识别的DNA序列上后,基因才开始表达。
常用载体:pGL3-Basic(左) 、pGL3-Promoter(右)