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CRE慢病毒
背景介绍


Cre重组酶,是来源于大肠杆菌噬菌体P1的一种类型I的拓朴异构酶(Type I topoisomerase), 也是一种酪氨酸重组酶(tyrosine recombinase)。


LoxP位点,是位于P1噬菌体中的34bp序列,由两个13bp的反向回文序列和8bp的中间间隔序列共同组成,间隔序列决定loxP的方向,loxP 位点的序列如下所示:

    13bp                         8bp           13bp

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Cre重组酶不仅具有催化活性,而且与限制酶相似,能识别特异的DNA序列,即loxP位点,使两个loxP位点间发生基因重组。Cre重组酶无需借助任何辅助因子,可作用于多种结构的DNA底物,如线形、环状甚至超螺旋DNA。


由于Cre/loxP系统作用方式高效简单,Cre/LoxP定位重组系统已在特定基因的删除、基因功能的鉴定、外源基因的整合、基因捕获及染色体工程等方面得到了有效的应用。

Cre-Loxp应用


当细胞基因组内存在两个loxP位点时,一旦有Cre重组酶出现,就会诱导两个loxP位点间的序列发生重组。首先,Cre重组酶结合到两个13bp的回文序列形成二聚体,然后这个二聚体和另外一个loxP位点上的二聚体结合,形成四聚体。LoxP位点是有方向的,形成四聚体的两个loxP位点是平行的,随后这两个loxP位点间的双链DNA被Cre重组酶切掉,然后切口在DNA连接酶的作用下重新连接。重组的结果取决于两个loxP位点的方向,主要有以下几种可能:


1.如果两个loxP位点位于一条DNA链上,且方向相同,Cre重组酶能有效敲除两个loxP位点间的序列(图1A);

2.如果两个loxP位点位于一条DNA链上,但方向相反,Cre重组酶能导致两个loxP位点间的序列翻转(图1B);

3.如果两个loxP位点分别位于两条不同的DNA链或染色体上,Cre酶能介导两条DNA链的交换或染色体易位(图1C)。



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GM-0220LV28
pGMLV-CAG-CRE Lentivirus
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pGMLV-CAG-CRE-PGK-Puro Lentivirus
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板块名称二
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板块名称三
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板块名称四
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板块名称五
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LoxP位点,是位于P1噬菌体中的34bp序列,由两个13bp的反向回文序列和8bp的中间间隔序列共同组成,间隔序列决定loxP的方向,loxP 位点的序列如下所示:

    13bp                         8bp           13bp

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Cre重组酶不仅具有催化活性,而且与限制酶相似,能识别特异的DNA序列,即loxP位点,使两个loxP位点间发生基因重组。Cre重组酶无需借助任何辅助因子,可作用于多种结构的DNA底物,如线形、环状甚至超螺旋DNA。


由于Cre/loxP系统作用方式高效简单,Cre/LoxP定位重组系统已在特定基因的删除、基因功能的鉴定、外源基因的整合、基因捕获及染色体工程等方面得到了有效的应用。

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当细胞基因组内存在两个loxP位点时,一旦有Cre重组酶出现,就会诱导两个loxP位点间的序列发生重组。首先,Cre重组酶结合到两个13bp的回文序列形成二聚体,然后这个二聚体和另外一个loxP位点上的二聚体结合,形成四聚体。LoxP位点是有方向的,形成四聚体的两个loxP位点是平行的,随后这两个loxP位点间的双链DNA被Cre重组酶切掉,然后切口在DNA连接酶的作用下重新连接。重组的结果取决于两个loxP位点的方向,主要有以下几种可能:


1.如果两个loxP位点位于一条DNA链上,且方向相同,Cre重组酶能有效敲除两个loxP位点间的序列(图1A);

2.如果两个loxP位点位于一条DNA链上,但方向相反,Cre重组酶能导致两个loxP位点间的序列翻转(图1B);

3.如果两个loxP位点分别位于两条不同的DNA链或染色体上,Cre酶能介导两条DNA链的交换或染色体易位(图1C)。



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