全面了解细胞的功能对推进细胞研究至关重要,通过揭示细胞行为的背后机制,可以对各种生物学过程了解得更加全面,为医学、生物科学等领域的进步开辟道路。细胞功能检测包括细胞增殖与活力检测、细胞凋亡检测、细胞周期分析、细胞迁移与侵袭、细胞自噬检测、细胞信号通路分析等多个方面。
全面了解细胞的功能对推进细胞研究至关重要,通过揭示细胞行为的背后机制,可以对各种生物学过程了解得更加全面,为医学、生物科学等领域的进步开辟道路。细胞功能检测包括细胞增殖与活力检测、细胞凋亡检测、细胞周期分析、细胞迁移与侵袭、细胞自噬检测、细胞信号通路分析等多个方面。
细胞功能检测中有关细胞活力的检测十分重要,其方法有多种,例如ATP生物发光法、LDH检测法、MTT比色法、CCK-8法和细胞凋亡检测法。
ATP生物发光法:生物体细胞内最重要的能量来源是ATP,是衡量细胞新陈代谢水平的重要指标。在同种细胞,近似的培养条件下,ATP的含量与活细胞数目具有良好的线性关系。即可通过ATP含量反应活细胞的数目。在ATP、镁离子和氧气存在的条件下,萤火虫荧光素酶能够把荧光素催化成氧化荧光素,在氧化的过程中会发出波长为560nm左右的生物荧光。即该反应为ATP依赖的发光反应。其发光强度与ATP含量线性相关。
LDH检测法:LDH在糖酵解中发挥着重要作用,可以将乳酸催化为丙酮酸,丙酮酸与2,4-二硝基苯肼的产物可以在碱性溶液中呈现棕红色,颜色的深浅与丙酮酸的浓度成正比,可以用于检测LDH的浓度。在细胞活力检测中,用于判断细胞膜完整程度。
MTT比色法:MTT是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜能溶解细胞中的甲臜,用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
CCK-8法:CCK-8试剂中含有WST–8,它在电子载体的作用下被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲臜产物,生成的甲臜物的数量与活细胞的数量成正比。用酶联免疫检测仪在450nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。
细胞凋亡检测法:可以特异性地检测细胞凋亡,如通过Annexin V染色结合凋亡细胞膜外翻的磷脂酰丝氨酸检测细胞凋亡。
全面了解细胞的功能对推进细胞研究至关重要,通过揭示细胞行为的背后机制,可以对各种生物学过程了解得更加全面,为医学、生物科学等领域的进步开辟道路。细胞功能检测包括细胞增殖与活力检测、细胞凋亡检测、细胞周期分析、细胞迁移与侵袭、细胞自噬检测、细胞信号通路分析等多个方面。
细胞功能检测中有关细胞活力的检测十分重要,其方法有多种,例如ATP生物发光法、LDH检测法、MTT比色法、CCK-8法和细胞凋亡检测法。
ATP生物发光法:生物体细胞内最重要的能量来源是ATP,是衡量细胞新陈代谢水平的重要指标。在同种细胞,近似的培养条件下,ATP的含量与活细胞数目具有良好的线性关系。即可通过ATP含量反应活细胞的数目。在ATP、镁离子和氧气存在的条件下,萤火虫荧光素酶能够把荧光素催化成氧化荧光素,在氧化的过程中会发出波长为560nm左右的生物荧光。即该反应为ATP依赖的发光反应。其发光强度与ATP含量线性相关。
LDH检测法:LDH在糖酵解中发挥着重要作用,可以将乳酸催化为丙酮酸,丙酮酸与2,4-二硝基苯肼的产物可以在碱性溶液中呈现棕红色,颜色的深浅与丙酮酸的浓度成正比,可以用于检测LDH的浓度。在细胞活力检测中,用于判断细胞膜完整程度。
MTT比色法:MTT是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜能溶解细胞中的甲臜,用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
CCK-8法:CCK-8试剂中含有WST–8,它在电子载体的作用下被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲臜产物,生成的甲臜物的数量与活细胞的数量成正比。用酶联免疫检测仪在450nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。
细胞凋亡检测法:可以特异性地检测细胞凋亡,如通过Annexin V染色结合凋亡细胞膜外翻的磷脂酰丝氨酸检测细胞凋亡。