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慢病毒cas9文库
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基因组范围的CRISPR敲除(GeCKO)文库

人基因组范围的CRISPR 敲除(GeCKO)文库,可用于快速获得功能缺失的突变体细胞,从而获得所期望的表型。GeCKO文库是gRNA的混合文库,含有123411个sgRNA靶向19050个基因。改进后的GeCKO v2.0文库含有非靶向gRNA作为对照,与此同时用来转导的慢病毒载体也同步进行了升级,以便更高效的富集病毒和提升病毒在原代细胞的转染效率。GeCKO文库已经被广泛使用于原代的人干细胞,癌细胞及各种稳定细胞系。


吉满GeCKO v2.0文库特点

吉满提供的GeCKO文库由两部分组成,分别是子文库A和B。每个基因的A库和B库包含6条sgRNA(A库和B库分别包含3条)。文库A和B分别包含1000个非靶向性的对照sgRNA。A文库中包含针对每个miRNA的4条sgRNA。我们建议尽量筛查整个文库,但是当细胞数量有限时,这种设计可以仅用单个子文库能够覆盖基因组范围

GeCKOv2 human library
Species human
Number of genes targeted 19050
Targeting constructs per gene 6 per gene(3 in library A,3 in library B)
Number of miRNA targeted 1864
Targeting constructs per miRNA 4 per miRNA
Control(non-targeting) sgRNAs 1000
Total sgRNA constructs 122411(65383 in library A,58028 in library B)

GeCKO v2.0文库载体选择

为了获得在慢病毒载体上对细胞高效的GeCKO文库,使用双载体系统可以获得最大的病毒滴度;在这个双载体系统中, Cas9(lentiCas9-Blast)和sgRNA(lentiGuide-Puro)分别使用了带有不同抗性筛选标记的单个病毒载体。

吉满提供如下有效使用的慢病毒载体以用于GeCKO文库筛选:

GeCKO载体

载体名称 gRNA 启动子 选择/筛选标记
pLentiGuide-Puro U6 Amp, Puro


客户所得

包装好的慢病毒颗粒


其它CRISPR/Cas9 相关服务

CRISPR gRNA质粒构建服务

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