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技术服务 >技术资料 >细胞增殖检测
细胞增殖检测

细胞增殖检测

1.      细胞代谢活性检测 

通过检测活细胞相关的物质的含量(如蛋白质、酶)等间接测定待活细胞的数量来评价细胞的增殖能力。

特点:间接测定,反应细胞活性而非是否在增殖;

常用方法:MTT,CCK8,XTT等

应用:细胞活力、药物作用的毒性,适合高通量分析实验。


2.      细胞DNA合成检测      

通过测定细胞的DNA合成含量来评价细胞

特点:直接测定DNA合成是检测细胞增殖最准确方法

常用方法:BrdU和EdU;

应用:细胞DNA修复,分化及细胞标记物追踪等。


3.      ATP浓度检测  

利用荧光素酶Luciferase反应细胞ATP的含量,进而反应细胞活性。

特点:结果灵敏;

常用方法:荧光素酶催化反应;

应用:高通量细胞增殖检测和筛选


4.      细胞增殖相关抗原检测

通过检测增殖细胞特异性地表达某些特定蛋白。

特点:反应体内肿瘤细胞的增殖能力,但是需组织切片不适合高通量;

常用方法:细胞增殖的标志物的免疫组化等;

应用:体内肿瘤组织。


5.      染料排斥法

活细胞有排斥木屑染料,如伊红、台盼蓝、苯胺黑等的能力,而死细胞由于膜完整性的破坏,可被着色。适合少量细胞的统计,广泛用于绘制细胞生长曲线等。


MTT

MTT比色法,是一种检测细胞存活和生长的方法。检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臢(Zā)(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲臢(Zā),用酶标仪在490nm波长处(英文说明书写的是570nm)测定其光吸收值,在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。根据测得的吸光度值(OD值),来判断活细胞数量,OD值越大,细胞活性越强(如果是测药物毒性,则表示药物毒性越小)。



CCK-8

CCK-8 kit是含有WST-8(化学名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)化合物,用于细胞增殖检测的一类检测试剂盒。它的作用原理类似于MTT,在电子耦合试剂作用下被细胞线粒体中的一些脱氢酶还原为具有高度水溶性的橙黄色甲臜((Formazan)。细胞增殖越快,生成的Formazan越多,则颜色就越深。用酶标仪在450nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。CCK-8 Kit方法已被广泛应用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选和细胞增殖试验等。检测原理是 WST-8(2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)在电子耦合载体1-Methoxy PMS存在的情况下,可以被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色甲臜产物(formazan),颜色的深浅与细胞的增殖成正比,与胞毒性成反比。使用酶标仪在450nm波长处测定OD值,间接反映活细胞数量。

BrdU

Brdu,即5-Bromo-2'-Deoxyuridine,中文全名5-溴脱氧尿嘧啶核苷,为胸腺嘧啶的衍生物,可代替胸腺嘧啶在DNA合成期(S期),活体注射或细胞培养加入,而后利用抗Brdu单克隆抗体,ICC染色,显示增殖细胞。同时结合其它细胞标记物,双重染色,可判断增殖细胞的种类,增殖速度,对研究细胞动力学有重要意义。

但由于抗体分子量大,难于掺入并被有效检测,因此BrdU检测需采用DNA酶或HCl或加热使DNA变性;这些处理方法会破坏抗原识别位点,此外许多细胞周期分析的染料都需要dsDNA,这种处理方法也使得同一样本无法同时进行细胞周期分析。对于植物细胞等有细胞壁的分析,采用抗体检测还需要消化细胞壁,细胞壁消化酶常含有一些杂质,会导致检测的可靠性降低,同时BrdU检测则需要进行长时间的孵育--几个小时甚至过夜。


EdU

EdU(5-Ethynyl-2’- deoxyuridine)是一种胸腺嘧啶核苷类似物,能够在细胞增殖时期代替胸腺嘧啶(T)渗入正在复制的DNA分子中,通过基于EdU与Apollo?荧光染料的特异性反应快速检测细胞DNA复制活性,适用于细胞增殖、细胞分化、生长与发育、DNA修复、病毒复制、细胞标记示踪等方面的研究,尤其适合进行siRNA、miRNA、小分子化合物及其他药物的筛选实验。

与BrdU检测方法相比,EdU检测方法更快速、更灵敏、更准确。EdU染料只有BrdU抗体的1/500,在细胞内很容易扩散,无需DNA变性(酸解、热解、酶解等),可有效避免样品损伤,而且无需抗原抗体反应,能在细胞和组织水平更准确地反映DNA复制活性。


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