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RNAi慢病毒服务

RNAi(shRNA)慢病毒构建与包装服务:




服务描述:

RNA干扰(RNA interference, RNAi) 现象是一种进化上保守的抵御转基因或外来病毒侵犯的防御机制。将与靶基因的转录产物mRNA 存在同源互补序列的双链RNA(double strand RNA, dsRNA) 导入细胞后,能特异性地降解该mRNA ,从而产生相应的功能表型缺失。RNAi提供了一种经济、快捷、高效的抑制特异基因表达的技术手段,有助于研究该基因在生物模型系统中的作用,是研究基因功能的重要工具,并且逐步成为病毒性疾病、遗传性疾病以及肿瘤等的基因治疗研究的一种手段。现今发现的主要起干扰作用的RNAi主要有两类小分子RNA:一类是microRNA(miRNA);另一类是siRNA (small interfering RNA)。

siRNA制备的方法一般有:化学合成siRNA,哺乳动物细胞载体shRNA克隆和慢病毒载体shRNA克隆。

利用慢病毒构建的shRNA与化学合成siRNA和基于瞬时表达载体构建的shRNA相比。一方面可以扩增瞬时表达的载体使用,另一方面,lentivirus-shRNA克隆经过慢病毒包装系统包装后,可用于感染传统转染试剂难于转染的细胞系如原代细胞,悬浮细胞和处于非分裂状态的细胞,并且在感染后可以整合到受感染细胞的基因组,进行长时间的稳定表达。shRNA慢病毒优势具体见表1。 

表1.各种siRNA制备方法比较

比较项目

化学合成siRNA

DNAshRNA

Lentiviral-shRNA

siRNA结构

双链RNA或发夹结构RNA

发夹结构RNA

发夹结构RNA

RNA干扰持续时间

<72小时

<10

>30

适合的细胞系

转染效率大于70%的细胞

转染效率大于20%

但是可以传代的细胞

几乎所有细胞

单次制备费用

重复使用费用

是否可自行扩增

不可以

可以

不可以

构建稳定表达siRNA

的细胞株

不满足

满足,但有风险

满足,可以同时制备

多种稳定表达细胞系

组织特异性干扰实验

不满足

满足

满足

干细胞分化实验

不满足

不满足

满足

裸鼠荷瘤实验

低重复性

低重复性

高重复性

转基因knockdown实验

不满足

不满足

满足


吉满生物科技(上海)有限公司主要提供以慢病毒为主的应用于临床前细胞学实验和整体动物实验的针对不同基因和药物靶标的各种即用型病毒颗粒。利用相关载体把shRNA导入细胞,载体中的U6 启动子确保shRNA总是表达;这种装载了shRNA载体可被传递到子代细胞中去,从而使基因的沉默是可遗传的。

 

RNAi作用原理:


吉满优势:


  • 慢病毒载体类型:最齐全的病毒包装载体
  • 安全性:最安全的第三代/第四代慢病毒包装体系
  • 超高滴度:精心优化的启动子和慢病毒包装细胞,实现超高滴度的病毒包装
  • 载体容量:独特的载体设计,最大可高效包装4kb
  • 高品质服务:客户导向型的高品质服务,一切以客户为中心


 

RNAi慢病毒产品效果图例:

       

                          图1.RNAi慢病毒感染的细胞株                             2.Western Blot检测结果

NC:阴性对照;S1-S4:RNAi干扰组

参考文献:

[1] Nature Reviews Genetics 4, 825-833 (October 2003) | doi:10.1038/nrg1183

[2] Lee, N.S. et al. Expression of small interfering RNAs targeted against HIV-1 rev transcripts in human cells. Nat. Biotechnol. 20, 500–505 (2002). 

[3] Brummelkamp, T.R., Bernards, R. & Agami, R. A system for stable expression of short interfering RNAs in mammalian cells. Science 296, 550–553 (2002). 

[4] McManus, M.T., Petersen, C.P., Haines, B.B., Chen, J. & Sharp, P.A. Gene silencing using micro-RNA designed hairpins. RNA 8, 842–850 (2002). 

[5] Miyagishi, M. & Taira, K. U6 promoter driven siRNAs with four uridine 3' overhangs efficiently suppress targeted gene expression in mammalian cells. Nat. Biotechnol. 20, 497–500 (2002). 

[6] Paddison, P.J., Caudy, A.A., Bernstein, E., Hannon, G.J. & Conklin, D.S. Short hairpin RNAs (shRNAs) induce sequence-specific silencing in mammalian cells. Genes Dev. 16, 948–958 (2002). 

[7] Paul, C.P., Good, P.D., Winer, I. & Engelke, D.R. Effective expression of small interfering RNA in human cells. Nat. Biotechnol. 20, 505–508 (2002).

[8] Sui, G. et al. A DNA vector-based RNAi technology to suppress gene expression in mammalian cells. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 99, 5515–5520 (2002).

[9] Yu, J.Y., DeRuiter, S.L. & Turner, D.L. RNA interference by expression of short-interfering RNAs and hairpin RNAs in mammalian cells. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 99, 6047–6052 (2002).

[10] Brummelkamp, T.R., Bernards, R. & Agami, R. Stable suppression of tumorigenicity by virus-mediated RNA interference. Cancer Cell 2, 243–247 (2002).

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