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技术服务 >蛋白表达与纯化服务 >原核蛋白表达与纯化
原核蛋白表达与纯化

服务描述:

该服务根据客户构建好的表达载体,并参考客户提供的实验方案,如温度、IPTG诱导浓度及表达时间,选择合适的E.coli菌株进行目的蛋白诱导表达并纯化。如果客户还没有构建好表达载体,我们也可以帮您将目的基因插入到特定的表达载体中,并摸索蛋白表达的最优条件。各项服务需额外加付少许费用。表达出的目的蛋白进行SDS-PAGE电泳和Western blot分析。

 

具体内容:

服务步骤

具体内容

交付内容

交付时间

目标基因亚克隆(可选)

1. 扩增并抽提含有目的基因的载体质粒。

2. 将目的基因亚克隆到合适的表达质粒上。

3. 测序验证构建质粒的准确性。

正确构建的重组表达质粒,含重组质粒的DH5α菌株及测序报告。

2-3

E. coli 表达菌株转化及筛选

1. 扩增并抽提构建好的表达质粒。

2. 将表达质粒转化到高效的E. coli表达菌株中。

3. 至少挑选3个阳性克隆于LB培养基中扩增并选择合适的条件,SDS-PAGE 检测蛋白表达情况,筛选出合适菌株。

重组质粒的表达菌株及表达检测报告。

2-3

目的蛋白的诱导表达及纯化

1. 对蛋白表达时间,温度以及IPTG浓度等表达条件进行优化,并诱导表达目的蛋白。

2. 摇瓶培养1L重组细菌,通过亲和层析,离子交换,疏水及凝胶过滤等方法纯化表达的重组蛋白。

3. 利用蛋白酶去除不需要的纯化标签(可选,注:构建表达载体时需加入合适的蛋白酶切位点),再纯化获得所需的目的蛋白。

4. 通过SDS-PAGE电泳检测每步结果并控制最终产品质量。

5.通过Western-blot验证目标蛋白正确性。

1mg纯化好的目的蛋白及纯化报告。可按客户要求提供含纯化标签或去除纯化标签的目的蛋白,纯度最高可达95%以上。

2-3


服务说明:


  • 如果客户自己已经有构建好的表达载体,须提供我们≥1ug的抽提质粒,而且该表达载体须已做过转化和表达,证明有目的蛋白表达。或直接提供我们有目的蛋白表达的新鲜或保存菌株。
  • 如果客户需要我们帮助构建表达载体,须提供我们含有目的基因片段的PCR产物或者已经连接到(TA)或其它克隆载体上的质粒(≥1ug)或菌液。
  • 表中的交付时间是我们的标准服务时间,如果客户还需蛋白复性等后续服务,服务时间需适当延长,但我们会尽最大努力以最快的速度完成我们的服务。


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