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技术服务 >腺相关病毒 >非编码RNA AAV包装 >miRNA腺相关病毒
miRNA腺相关病毒

产品简介:

miR-AAV过表达,根据客户研究的miRNA,将pri-miRNA及其上下游200bp构建到腺相关病毒质粒,生产的病毒颗粒可以直接用于感染细胞或者动物实验。

miR-AAV干扰,根据客户研究的miRNA,设计构建干扰腺相关病毒质粒,生产的病毒颗粒可以直接用于感染细胞或者动物实验。

服务流程:

过表达

 

干扰


产品优势:

l  操作简洁,无需转染试剂

l  实验周期短

l  对分裂期和非分裂期细胞均有感染作用

l  安全性可靠,低免疫原性

l  可在短时间内获得稳定表达特定microRNA的细胞株 



附表1.各种RNAi制备方法的比较:

附表2.可供选择的载体;

附表3.不同血清型AAV的组织嗜亲性;

附表4.不同AAV血清型对相同的组织和细胞具有不同的感染效率;

附表5.各种病毒的特点;

附图6. RNAi作用原理。


附表1.各种RNAi制备方法的比较:

比较项目

化学合成siRNA

载体shRNA

慢病毒shRNA

腺相关病毒shRNA

siRNA结构

双链RNA或发夹结构RNA

发夹结构RNA

发夹结构RNA

发夹结构RNA

RNA干扰持续时间

<72小时

<10

>30

>60

适合的细胞系

转染效率大于70%细胞

转染效率大于20%,但是可以传代细胞

几乎所有细胞

多种血清型适应不同细胞

单次制备费用

重复使用费用

是否可自行扩增

不可以

可以

不可以

不可以

构建细胞稳转株

不满足

满足,但有风险

满足,可以同时制备多种稳定表达细胞系

满足

组织特异性干扰实验

不满足

满足

满足

满足

干细胞分化实验

不满足

不满足

满足

满足

裸鼠荷瘤实验

低重复性

低重复性

高重复性

高重复性

转基因knockdown

不满足

不满足

满足

满足

 

附表2.可供选择的载体:

编号

载体类型

载体用途

载体元件

PGMAAV-MA2

腺相关病毒

miRNA过表达

GPAAV-CMV-mCherry-MCS-WPRE

PGMAAV-MA1

腺相关病毒

miRNA过表达

GPAAV-CMV-eGFP-MCS-WPRE

PGMAAV-SB1

腺相关病毒

miRNA干扰

PGMAAV-CMV-intron-ZsGreen1-hU6-MCS

PGMAAV-4381

腺相关病毒

miRNA干扰

PGMAAV-CMV-intron-mCherry-hU6-MCS

 

附表3.不同血清型AAV的组织嗜亲性:

吉满生物在包装腺相关病毒时有多种不同的AAV血清型可供客户选择,建议客户针对不同组织器官选择相应血清型的AAV病毒,见下表。

血清型

组织亲和性

AAV1

肌肉,心脏,骨骼肌(包括心肌),神经组织

AAV2

中枢神经,肌肉,肝脏,脑组织,眼,

AAV3

肌肉,肝脏,肺,眼

AAV4

中枢神经,肌肉,眼,脑

AAV5

肺,眼,中枢神经,关节滑膜,胰腺 

AAV6

肺,心脏

AAV7

肌肉,肝脏

AAV8

肝脏,眼,中枢神经,肌肉

AAV9

心脏,肌肉,肺(肺泡),肝脏,中枢神经

DJ

视网膜,肝脏,肺,肾脏

DJ/8

大脑组织,其他离体组织

Rh10

肺,心脏,肌肉,中枢神经,肝脏

 

附表4.不同AAV血清型对相同的组织和细胞具有不同的感染效率:

Cell Line

AAV-1

AAV-2

AAV-3

AAV-4

AAV-5

AAV-6

AAV-8

AAV-9

AAV-DJ

AAV-DJ/8

Huh-7

13

100

2.5

0.0

0.1

10

0.7

0.0

500

0.2

HEK293

25

100

2.5

0.1

0.1

5

0.7

0.1

500

0.3

HeLa

3

100

2.0

0.1

6.7

1

0.2

0.1

667

0.2

HepG2

3

100

16.7

0.3

1.7

5

0.3

ND

1250

0.5

Hep1A

20

100

0.2

1.0

0.1

1

0.2

0.0

400

0.1

911

17

100

11

0.2

0.1

17

0.1

ND

500

0.0

CHO

100

100

14

1.4

333

50

10

1.0

25000

5.0

COS

33

100

33

3.3

5.0

14

2.0

0.5

500

0.3

MeWo

10

100

20

0.3

6.7

10

1.0

0.2

2857

1.0

NIH3T3

10

100

2.9

2.9

0.3

10

0.3

ND

500

0.1

A549

14

100

20

ND

0.5

10

0.5

0.1

1000

0.1

HT1180

20

100

10

0.1

0.3

33

0.5

0.1

333

0.2

Monocytes

1111

100

ND

ND

125

1429

ND

ND

100

ND

Immature DC

2500

100

ND

ND

222

2857

ND

ND

200

ND

Mature DC

2222

100

ND

ND

333

3333

ND

ND

100

ND

AAV-2 作为标准,感染效率为 100. ND =未检测

[1]Grimm D, Lee J S, Wang L, et al. In vitro and in vivo gene therapy vector evolution via multispecies interbreeding and retargeting of adeno-associated viruses [J]. Journal of virology, 2008, 82(12): 5887-5911.

 

附表5.各种病毒的特点:

病毒表达系统

腺病毒表达系统

慢病毒表达系统

腺相关病毒系统

病毒基因组

双链DNA病毒

RNA病毒

单链DNA病毒

是否整合

病毒基因组游离于宿主基因组外,瞬时表达外源基因

病毒基因组整合于宿主基因组,长时间、稳定表达外源基因

低频整合

感染细胞类型

感染分裂和不分裂细胞

感染分裂和不分裂细胞

分裂和非分裂细胞

表达丰度

高水平表达

高水平表达

高水平表达

表达时间

快(1-2 天)

慢(2-4 天)

快(1-2 天)

滴度

滴度高达1E12pfu/ml

最高可达1E910TU/ml

最高可达1E913TU/ml

克隆容量

可插入高达8kb的外源片段,滴度随插入片段长度增加而降低

可插入不超过8kb的外源片段,滴度随插入片段长度增加而降低

可插入不超过3 kb外源DNA片段,滴度随插入片段长度增加而降低

免疫原性

高免疫原性

低免疫原性

低免疫原性

动物模型

不能得到转基因动物

可产生转基因动物,效率达50以上

可产生转基因动物

启动子

可以更换特异性启动子

可以更换特异性启动子

可以更换特异性启动子

能否用于MIRCORNA

可以

可以

可以

能否用于四环素诱导

不可以

TET-ONTET-OFF

TET-ONTET-OFF

 

附图6.RNAi作用原理:

 

其它相关产品:

Ø  现货光遗传AAV腺相关病毒

Ø  现货CRISPR/Cas9慢病毒(适用于难感染细胞)

Ø  CRISPR/Cas9基因敲除稳定株构建

Ø  慢病毒/腺病毒/腺相关病毒包装服务

Ø  报告基因构建与检测服务

 

 

 

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