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技术服务 >技术资料 >病毒如何选择
病毒如何选择

病毒如何选择——慢病毒or腺相关病毒

病毒的转导效率比常规真核表达载体高很多,因此特别适合于介导外源基因在难转染甚至无法转染的哺乳动物细胞中表达。现在常用的病毒有慢病毒、腺病毒、逆转录病毒和腺相关病毒,您项目正在考虑是做慢病毒?还是腺相关病毒?这两种病毒在提高基因表达量,缩短实验周期上各有优势,但是有时可能因为实验目的不同,需要选择合适的病毒进行实验研究,具体选择何种病毒要可根据这两种病毒各自的特点来决定:

慢病毒(Lentivirus

优点:

  • 可以插入细胞基因组,稳定表达,持续时间长;  
  • 包装周期短(一般要两个月)。

缺点:

  •  不能扩增,一次包装的病毒用完后如果再需要只能重新包装,成本高。一次包装所得到的的病毒滴度也相对较低(108pfu/ml);
  •  不大适合直接用于动物实验;


腺相关病毒(Adenovirus associated virus

优点:

  • 做动物体内实验首选;
  • 安全性高;
  • 特异性强;
  • 表达时间长(半年以上);
  • 感染动物体内效率高。用在肝脏,脑部,心脏,肺部,眼睛较多。

缺点:

  • 容量小;感染体外细胞效率不高。


总体来说,对于很多动物实验来说,选择腺相关病毒的优势更大。

与慢病毒相比,腺相关病毒免疫原性较低,有多种血清型,根据组织亲和性,及选择组织特异性启动子,可感染不同组织。

动物实验需要的病毒量大,且病毒的滴度要很高,这样才能达到最小体积注射足够的病毒的目的。

目前慢病毒能达到的最高有效滴度一般是108 pfu/ml,如果注射一只小鼠所需的病毒量至少1x108pfμ/ml,而一只大鼠如果至少需要109 pfu/ml,这样包装一次的慢病毒只能用于一只动物。

同时,如果用慢病毒的话,要大约1ml的注射体积才能达到动物所需的病毒量,这个体积的液体量对于动物体是有害的,尤其是注射脑部,动物是承受不住的。

腺相关病毒的滴度可达1011 v.g/ml 或1012 v.g/ml 或1013 v.g/ml,用于动物实验时,用普通的腺相关病毒的滴度1011 v.g/ml,每只小鼠只需要1μl,而每只大鼠10μl这样既可,一次包装的腺相关病毒足以完成一次动物实验研究。

同时腺相关病毒可以扩增的,一次包装的腺相关病毒用完后不需要重头再次包装,而只要再扩增纯化即可,这样在经济成本和时间成本上都会节省很多。


病毒表达系统

慢病毒系统

腺相关病毒系统

病毒基因组

RNA病毒

单链DNA病毒

是否整合

病毒基因组整合于宿主基因组,长时间、稳定表达外源基因

低频整合。可形成稳定伴随体。

感染细胞类型

感染分裂和不分裂细胞

分裂和非分裂细胞

表达丰度

高水平表达

高水平表达

表达时间

慢(2-4 天)

快(1-2 天)

滴度

最高可达1E9TU/ml

最高可达1E9-1E13v.g/ml

常规滴度范围

1E6-5E9TU/ml

1E12-5E13v.g/ml

克隆容量

可插入不超过8kb的外源片段,滴度随插入片段长度增加而降低

  可插入不超过3 kb外源DNA片段,滴度随插入片段长度增加而降低

常规可插入目的基因长度

<1.5k,滴度~5E7TU/ML,单标滴度较双标高;

<2.5k,建议单标,滴度~5E7TU/ML

3.5k8盘高浓,滴度~1E7TU/ML,可以此为标准建议大包,高浓

2.5k左右

免疫原性

低免疫原性

低免疫原性

动物模型

可产生转基因动物,效率达50%以上

可用于转基因动物

稳定株

可以

极少用于细胞

组织特异性

扩散能力

     

                                                                AAV动物实验方法总结

部位

注射器材

可注射体积

病毒量

脑室

大鼠

30-33GHamilton

不超过5μl

10E9v.g

小鼠

30-33GHamilton

不超过2μl

10E8v.g

核团

大鼠

直径为10-20μm的玻璃微量注射器

不超过5μl

10E9v.g

小鼠

直径为10-20μm的玻璃微量注射器

不超过2μl

10E8v.g

VTA

大鼠

直径为10-20μm的玻璃微量注射器

不超过5μl

10E9v.g

小鼠

直径为10-20μm的玻璃微量注射器

不超过2μl

10E8v.g

海马体

大鼠

30-33GHamilton

不超过5μl

10E9v.g

小鼠

30-33GHamilton

不超过2μl

10E8v.g

注:不同部分具体注射体积根据病毒浓度决定,注射的病毒滴度也要根据具体注射的体积相应调整。


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