抗生素简介
抗生素(Antibiotic)，是指由微生物(包括细菌、真菌、放线菌属)或高等动植物在生活过程中所产生的具有抗病原体或其他活性的一类次级代谢产物，能干扰其他生活细胞发育功能的化学物质，用于抑制微生物生长或者杀死微生物，一般用来抑制感染。细胞实验中抗生素常常用于转染抗性筛选。
转染与抗性筛选
转染(Transfection)是真核细胞主动或被动导入外源核酸片段而获得新表型的过程，引入的遗传物质(DNA和RNA)稳定或暂时存在于细胞中，因此转染可分为瞬时转染和稳定转染。
瞬时转染（transient transfection）
外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中，因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数，产生高水平表达。遗传物质会因环境因素和细胞分裂而丢失，通常只持续几天，多用于启动子和其他调控元件的分析。需要尽快在蛋白或基因水平进行相应的检测。
稳定转染（Stable transfected）
外源遗传物质既可以整合到宿主细胞基因组中，也可能作为一种游离体（episome）存在。引入的遗传物质带有抗性基因，转染至细胞后通过选择性标记反复筛选，得到稳定转染的同源细胞系。即使在宿主细胞分裂传代后也能维持转基因的表达。
想要长期稳定获取某种重组蛋白以及需要长期在某种细胞系中研究目的基因功能时，可以构建稳转株来降低频繁的转染操作来降低实验成本。
如何筛选稳转细胞株
构建稳转株时可以把基因序列构建在含有生物抗性基因的载体上(质粒/慢病毒载体），重组载体转染目的细胞后通过抗性药物持续筛选，未转染进质粒的细胞因为不能表达抗性蛋白，在筛选过程中会被药物杀死，剩下我们所需要的细胞。
常见的抗性筛选标记
一、嘌呤霉素
嘌呤霉素是通过提前链终止，起到抑制蛋白合成的作用。但在嘌呤霉素-N-乙酰转移酶作用下，嘌呤霉素乙酰化而失活。
嘌呤霉素盐酸盐用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化，推荐使用浓度为0.1-10µg/ml。对于第一次使用的实验体系建议通过预实验筛选出最小致死浓度。
二、遗传霉素（G418）
在分子遗传实验中，是稳定转染最常用的筛选试剂。G418和类似的抗生素能干扰核糖体功能，阻断蛋白合成。含氨基糖苷磷酸转移酶的细胞，能将G418转变成无毒形式。
针对细胞系，通过建立细胞杀伤曲线，确定G418能杀死未转染细胞的最适浓度。筛选时，用不同浓度的G418处理转染后的细胞，持续2～3周的培养筛选，通过肉眼观察，或Giemsa或龙胆紫染色后进行计数，选择细胞存活数量最多的浓度。选择最低浓度，是为了获得稳定转染的细胞系。推荐使用浓度为500-1000μg/ml。
三、潮霉素B
潮霉素B是吸水链霉菌产生的抗生素，抑制细胞内的蛋白质合成。潮霉素B磷酸转移酶能使这个抗生素失效。和G418类似，针对第一次使用的细胞系建立细胞杀伤曲线，确定最适浓度。在含合适浓度的培养基中，培养筛选转染细胞。推荐使用浓度为50-1000μg/ml。
四、杀稻瘟菌素S
杀稻瘟菌素S是抗生素，通过阻断氨酰-tRNA形成肽段，来抑制蛋白质合成。携带bsr抗性基因或BSD抗性基因的细胞可编码杀稻瘟菌素脱氨基酶，在含杀稻瘟菌素S条件下存活。
杀稻瘟菌素S用于哺乳动物细胞系的工作浓度为3～50ug/mL，需要针对每个细胞系测定最佳浓度。
五、盐酸博莱霉素
盐酸博来霉素是博来霉素/腐草霉素抗生素家族的一个成员，是从Streptomyces verticillus中分离的水溶性、铜离子螯合糖蛋白抗生素，铜离子存在使得溶液呈蓝色。这种铜离子螯合形式是没有活性的，当抗生素进入细胞后，Cu2+被还原成 Cu+，并被细胞中的巯基化合物除去。此时，盐酸博来霉素才被活化并与 DNA 结合，对 DNA 进行切割，从而引起细胞死亡。而盐酸博来霉素耐受基因（Sh ble）编码的蛋白质可以与盐酸博来霉素结合，并抑制盐酸博来霉素切割 DNA。
吉满抗生素产品
吉满可提供不同规格的嘌呤霉素盐酸盐、杀稻瘟菌素S(灭瘟素)Blasticidin S、遗传霉素G418 Sulfate、潮霉素B(hygromycin B)等抗生素可用于细胞实验中的抗性筛选。点击了解产品
产品名称 | 货号 | 规格 |
嘌呤霉素盐酸盐Puromycin dihydrochloride | GM-040401 | 25mg/100mg/ 250mg/500mg/1g |
遗传霉素G418 Sulfate(Geneticin) | GM-040402 | 1g/5g |
潮霉素B Hygromycin B | GM-040403 | 1g/10g |
杀稻瘟菌素S(灭瘟素)Blasticidin S | GM-040404 | 10mg/5*10mg |
盐酸博莱霉素 | GM-040407 | 100mg/100mg*10 |
