背景介绍
生物体细胞是一个高度有序的结构，细胞内根据空间分布和功能不同，可以分成不同的细胞器或细胞区域，如：细胞核、高尔基体、内质网、线粒体和细胞膜等。
蛋白质在核糖体中合成后经蛋白质分选信号引导后被转运到特定的细胞器中，部分蛋白则被分泌到细胞外或留在细胞质中，只有转运到正确的部位才能参与细胞的各种生命活动。所以，蛋白质的亚细胞定位分析就日益重要。
亚细胞定位
亚细胞定位研究是查找生物大分子在细胞内的具体存在的位置，如在核内、胞质内或者细胞膜上存在。
蛋白质在细胞质中经过翻译并合成，由蛋白质分选信号引导而被转运到特定的亚细胞结构中以参与细胞的各种生命活动。这项研究对于理解细胞的功能、信号传导、代谢过程以及疾病机制等方面具有重要意义。
应用领域
疾病研究：通过研究亚细胞定位的变化，揭示疾病的机制，如癌症、神经退行性疾病等。
药物开发：了解药物在细胞内的分布和作用机制。
研究方法
一、免疫荧光法
1）直接法：将标记的特异性荧光抗体，直接加在抗原标本上，经一定的温度和时间的染色，用水洗去未参加反应的多余荧光抗体，室温下干燥后封片、镜检。
2）间接法：如检查未知抗原，先用已知未标记的特异抗体（第一抗体）与抗原标本进行反应，用水洗去未反应的抗体，再用标记的抗抗体（第二抗体）与抗原标本反应，使之形成抗体—抗原—抗体复合物，再用水洗去未反应的标记抗体，干燥、封片后镜检。如果检查未知抗体，则表明抗原标本是已知的，待检血清为第一抗体，其它步骤的抗原检查相同。
二、融合报告基因
主要指将绿色荧光蛋白（GFP）及其衍生蛋白、β-葡萄糖苷酸酶（GUS）等报告基因，与目标蛋白基因融合在一起，由目标蛋白的引导信号进行亚细胞定位，对报告蛋白的光信号进行跟踪和观察，从而确定目标蛋白的定位。该方法是目前使用最广泛的蛋白质亚细胞定位研究方法。
三、生物信息学预测法
不同的细胞器往往具有不同的理化环境，它根据蛋白质的结构及表面理化特征，选择性容纳蛋白。蛋白质表面直接暴露于细胞器环境中，它由序列折叠过程决定，而后者取决于氨基酸组成。因此可以通过氨基酸组成进行亚细胞定位的生物信息学预测。
四、亚细胞结构分离定位法
该方法是通过超速离心等技术分离各亚细胞结构，然后从分离物种进一步提取蛋白质，对目标蛋白质进行分析或检测，从而获得目标蛋白的定位。本方法适合研究某蛋白质组级别的细胞器定位，通常与双向凝胶电泳分离和质谱技术相结合。
吉满产品原理
将目标蛋白与荧光蛋白的N端或者C端融合，通过瞬时转化技术或者遗传转化技术，使得该融合蛋白在受体材料细胞内表达，目标蛋白会牵引荧光蛋白一起定位到目标细胞器，通过观察荧光蛋白在细胞内显示的位置，确定目标蛋白的位置，从而确定目标蛋白的亚细胞定位情况。在此基础上，同时转入一个Marker载体，可以明确目标蛋白具体的定位信息，相比于普通亚细胞定位，共定位得到的结果更加准确。
吉满亚细胞定位相关产品
吉满生物可提供适用于亚细胞定位示踪的相关质粒、慢病毒及细胞系等现货相关产品，同时可根据客户需求进行定制服务。通过亚细胞定位蛋白或信号肽融合荧光蛋白的构建，使得特定的亚细胞结构呈现绿色荧光，可用于亚细胞结构标记的相关实验或者亚细胞定位基因的研究。点击了解产品
细胞示踪蛋白质粒
利用融合的GFP或RFP为marker去标记细胞的区室、细胞器、囊泡和结构。具体产品列表如下：
亚细胞定位慢病毒
亚细胞定位细胞系
案例展示
Nicorandil alleviates cardiac microvascular ferroptosis in diabetic cardiomyopathy: Role of the mitochondria-localized AMPK-Parkin-ACSL4 signaling pathway
图1 采用免疫荧光染色法（激光共聚焦荧光显微镜）
检测ACSL4和Tomm20的共定位
（引自 Pharmacological Research, 2024, 200: 107057）
图2 采用免疫荧光染色法（激光共聚焦荧光显微镜）
检测AMPKα1和Tomm20的共定位
（引自 Pharmacological Research, 2024, 200: 107057）
